目的研究八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)与胆囊收缩素2受体(cholecystokinin 2 receptor,CCK2R)结合对甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)诱导的神经元凋亡的抑制作用,并探讨β-arrestin 2在CCK-8抑制METH诱导神经元凋亡中的信号转导机制。
方法培养SH-SY5Y细胞和慢病毒转染的HEK293-CCK1R和HEK293-CCK2R细胞,应用干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减β-arrestin 2的表达。采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western印迹法检测凋亡相关蛋白的表达。
结果1 mmol/L、2 mmol/L METH可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,核碎裂、固缩的细胞数量显著增加,凋亡相关蛋白Bax和活化型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达升高。0.1 mmol/L和1 mmol/L CCK-8预处理均可逆转METH诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,并抑制METH引起的核碎裂、固缩的细胞数量增多以及凋亡相关蛋白的改变。慢病毒转染构建HEK293-CCK1R和HEK293-CCK2R细胞,发现CCK-8对METH诱导HEK293-CCK1R细胞凋亡相关蛋白的变化无明显影响,但可抑制METH诱导的HEK293-CCK2R细胞凋亡相关蛋白表达水平的升高。敲减SH-SY5Y细胞的β-arrestin 2表达后可阻断CCK-8对METH诱导细胞凋亡的抑制作用。
结论CCK-8可与CCK2R结合,并通过激活β-arrestin 2信号抑制METH诱导的细胞凋亡。