应用CD83和HSF5鉴别生前与死后皮肤烧伤

doi:10.12116/j.issn.1004-5619.2020.400401

摘要/Abstract

摘要： 目的

探究白细胞分化抗原83 （cluster of differentiation 83，CD83）和热休克转录因子5 （heat shock transcription factor 5，HSF5）鉴别生前、死后皮肤烧伤的法医学应用价值。

方法

通过逆转录实时定量聚合酶链反应（reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR），定量检测生前及死后烧伤小鼠皮肤组织和人类皮肤组织中CD83和HSF5 mRNA的表达情况。

结果

与空白对照和死后烧伤组相比，生前烧伤组小鼠CD83和HSF5的mRNA水平明显升高，且死后96 h 可检测CD83 mRNA高表达，死后72 h可检测HSF5 mRNA表达。15例人类烧伤皮肤和未烧伤自身皮肤相比，11例样本CD83和HSF5的mRNA水平在烧伤处升高（P<0.05），4例没有变化。

结论

CD83和HSP5有望作为生前烧伤鉴定的生活反应指标应用于法医学实践。

关键词: 法医病理学, 烧伤, 皮肤, 生前烧伤, 死后烧伤, 白细胞分化抗原83, 热休克转录因子5, 小鼠

Abstract: Objective

To explore the forensic application value of cluster of differentiation 83 （CD83） and heat shock transcription factor 5（HSF5） in identifying antemortem and postmortem skin burns.

Methods

Through reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction （RT-qPCR）, CD83 and HSF5 mRNA levels in the skin tissues of antemortem and postmortem burned mice and human samples were detected quantitatively.

Results

Compared with the control group and the postmortem burned group, the mRNA levels of CD83 and HSF5 in antemortem burned mice were higher. The high mRNA expressions of CD83 could be detected 96 h after death, and the mRNA expressions of HSF5 could be observed 72 h after death. Compared with undamaged skin, increased CD83 and HSF5 mRNA levels were detected in 11 out of 15 cases（P<0.05）.

Conclusion

CD83 and HSF5 can be used in forensic practice as indicators for vital reaction in antemortem burn identification.

Key words: forensic pathology, burns, skin, antemortem burns, postmortem burns, cluster of differentiation 83, heat shock transcription factor 5, mice

中图分类号:

DF795.1

赵龙瑞, 肖静, 尚晴, 李涛, 刘新社, 官方霖. 应用CD83和HSF5鉴别生前与死后皮肤烧伤[J]. 法医学杂志, 2021, 37(5): 627-631.

Long-rui ZHAO, Jing XIAO, Qing SHANG, Tao LI, Xin-she LIU, Fang-lin GUAN. Application of CD83 and HSF5 to Identify Antemortem and Postmortem Skin Burns[J]. Journal of Forensic Medicine, 2021, 37(5): 627-631.

图/表 5

参考文献 12

1	FUJIMOTO Y， TEDDER T F. CD83， a regulatory molecule of the immune system with great potential for therapeutic application[J]. J Med Dent Sci，2006，53（2）：85-91. doi：10.11480/jmds.530201.
2	HORVATINOVICH J M， GROGAN E W， NORRIS M， et al. Soluble CD83 inhibits T cell activation by binding to the TLR4/MD-2 complex on CD14⁺ monocytes[J]. J Immunol，2017，198（6）：2286-2301. doi：10.4049/jimmunol.1600802.
3	SAJU J M， HOSSAIN M S， LIEW W C， et al. Heat shock factor 5 is essential for spermatogenesis in zebrafish[J]. Cell Rep，2018，25（12）：3252-3261.e4. doi：10.1016/j.celrep.2018.11.090.
4	LYU H P， CHENG M， LIU J C， et al. Differentially expressed microRNAs as potential markers for vital reaction of burned skin[J]. J Forensic Sci Med，2018，4（3）：135-141. doi：10.4103/jfsm.jfsm_1_18.
5	KIMURA A， ISHIDA Y， NOSAKA M， et al. Autophagy in skin wounds： A novel marker for vital reactions[J]. Int J Leg Med，2015，129（3）：537-541. doi：10.1007/s00414-015-1168-4.
6	JIANG S K， ZHANG M， TIAN Z L， et al. The distribution and time-dependent expression of MAGL during skeletal muscle wound healing in rats[J]. Histol Histopathol，2015，30（10）：1243-1254. doi：10.14670/HH-11-625.
7	GAUCHOTTE G， WISSLER M P， CASSE J M， et al. FVIIIra， CD15， and tryptase performance in the diagnosis of skin stab wound vitality in forensic pathology[J]. Int J Leg Med，2013，127（5）：957-965. doi：10.1007/s00414-013-0880-1.
8	WEIS A， BOHNERT M. Expression patterns of adhesion molecules P-selectin， von Willebrand factor and PECAM-1 in lungs： A comparative study in cases of burn shock and hemorrhagic shock[J]. Forensic Sci Int，2008，175（2）：102-106. doi：10.1016/j.forsciint.2007.05.015.
9	BOHNERT M， ANDERSON J， ROTHSCHILD M A， et al. Immunohistochemical expression of fibronectin in the lungs of fire victims proves intravital reaction in fatal burns[J]. Int J Leg Med，2010，124（6）：583-588. doi：10.1007/s00414-010-0437-5.
10	MARSCHALL S， ROTHSCHILD M A， BOHNERT M. Expression of heat-shock protein 70 （Hsp70） in the respiratory tract and lungs of fire victims[J]. Int J Leg Med，2006，120（6）：355-359. doi：10.1007/s00414-006-0105-y.
11	KUBO H， HAYASHI T， AGO K， et al. Forensic diagnosis of ante- and postmortem burn based on aquaporin-3 gene expression in the skin[J]. Legal Med （Tokyo），2014，16（3）：128-134. doi：10.1016/j.legalmed.2014.01.008.
12	SCHROEDER A， MUELLER O， STOCKER S， et al. The RIN， an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements[J]. BMC Mol Biol，2006，7：3. doi：10.1186/1471-2199-7-3.

案例	年龄/岁	性别	死亡原因	伤后存活时间/h	死后经过时间/h	损伤部位	烧伤程度	RIN
1	35	女	重度烧伤	<1	59	胸部	Ⅱ度	4.5
2	51	男	重度烧伤	<1	75	背部	Ⅱ度	3.7
3	54	男	重度烧伤及CO中毒	<1	60	腹部	Ⅱ度	4.4
4	23	男	重度烧伤	<1	50	肩部	Ⅱ度	3.9
5	35	男	重度烧伤及CO中毒	<1	61	胸部	Ⅱ度	4.6
6	27	女	重度烧伤及CO中毒	<1	63	胸部	Ⅱ度	4.8
7	33	女	重度烧伤	<1	73	背部	Ⅱ度	4.6
8	47	男	重度烧伤	<1	65	腹部	Ⅱ度	3.4
9	46	男	重度烧伤	<1	69	胸部	Ⅱ度	4.2
10	55	女	重度烧伤	<1	60	肩部	Ⅱ度	3.8
11	52	男	重度烧伤	<1	61	肩部	Ⅱ度	4.6
12	28	男	重度烧伤	<1	52	腹部	Ⅱ度	4.9
13	36	男	重度烧伤及CO中毒	<1	62	腹部	Ⅱ度	4.3
14	47	女	重度烧伤	<1	56	胸部	Ⅱ度	4.8
15	36	男	CO中毒	<1	66	背部	Ⅱ度	5.0

案例	年龄/岁	性别	死亡原因	伤后存活时间/h	死后经过时间/h	损伤部位	烧伤程度	RIN
1	35	女	重度烧伤	<1	59	胸部	Ⅱ度	4.5
2	51	男	重度烧伤	<1	75	背部	Ⅱ度	3.7
3	54	男	重度烧伤及CO中毒	<1	60	腹部	Ⅱ度	4.4
4	23	男	重度烧伤	<1	50	肩部	Ⅱ度	3.9
5	35	男	重度烧伤及CO中毒	<1	61	胸部	Ⅱ度	4.6
6	27	女	重度烧伤及CO中毒	<1	63	胸部	Ⅱ度	4.8
7	33	女	重度烧伤	<1	73	背部	Ⅱ度	4.6
8	47	男	重度烧伤	<1	65	腹部	Ⅱ度	3.4
9	46	男	重度烧伤	<1	69	胸部	Ⅱ度	4.2
10	55	女	重度烧伤	<1	60	肩部	Ⅱ度	3.8
11	52	男	重度烧伤	<1	61	肩部	Ⅱ度	4.6
12	28	男	重度烧伤	<1	52	腹部	Ⅱ度	4.9
13	36	男	重度烧伤及CO中毒	<1	62	腹部	Ⅱ度	4.3
14	47	女	重度烧伤	<1	56	胸部	Ⅱ度	4.8
15	36	男	CO中毒	<1	66	背部	Ⅱ度	5.0

来源	基因	基因序列号	引物	序列（5′→3′）	扩增产物长度/bp
小鼠	GAPDH	NC_000072.6	正向	AATGGTGAAGGTCGGTGTGAAC	180
			反向	GCCTTGACTGTGCCGTTGAA
小鼠	CD83	NC_000079.6	正向	CGCAGCTCTCCTATGCAGTG	136
			反向	GTGTTTTGGATCGTCAGGGAATA
小鼠	HSF5	NC_000077.6	正向	GGTTTAGATCGCACCCCGATT	116
			反向	AGTACAGGAAATGGAACCCCT
人	GAPDH	NC_000012.12	正向	ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG	112
			反向	GCCATCACGCCACAGTTTC
人	CD83	NC_000006.12	正向	GAGAAACCTAAGTGGCAAGGTG	96
			反向	AGGACAATCTCCGCTCTGTAT
人	HSF5	NC_000017.11	正向	TTCGTCGAGATAGTTTGTCTCCT	88
			反向	GTCCGATCTAAACCTTTCAGAGG

来源	基因	基因序列号	引物	序列（5′→3′）	扩增产物长度/bp
小鼠	GAPDH	NC_000072.6	正向	AATGGTGAAGGTCGGTGTGAAC	180
			反向	GCCTTGACTGTGCCGTTGAA
小鼠	CD83	NC_000079.6	正向	CGCAGCTCTCCTATGCAGTG	136
			反向	GTGTTTTGGATCGTCAGGGAATA
小鼠	HSF5	NC_000077.6	正向	GGTTTAGATCGCACCCCGATT	116
			反向	AGTACAGGAAATGGAACCCCT
人	GAPDH	NC_000012.12	正向	ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG	112
			反向	GCCATCACGCCACAGTTTC
人	CD83	NC_000006.12	正向	GAGAAACCTAAGTGGCAAGGTG	96
			反向	AGGACAATCTCCGCTCTGTAT
人	HSF5	NC_000017.11	正向	TTCGTCGAGATAGTTTGTCTCCT	88
			反向	GTCCGATCTAAACCTTTCAGAGG

组别	CD83	HSF5
空白对照	1.00±0.21	1.00±0.18
死后烧伤	1.00±0.12^1）	1.07±0.29^1）
生前烧伤
死后0 h	135.99±15.00^2）	33.60±8.40^2）
死后6 h	122.03±4.59^2）	29.66±5.33^2）
死后12 h	115.00±0.23^2）	21.00±6.27^2）
死后24 h	80.66±4.36^2）	12.37±3.94^2）
死后48 h	50.02±3.24^2）	8.63±4.34^2）
死后72 h	26.69±2.63^2）	4.88±3.27^2）
死后96 h	5.27±1.70^2）	1.65±2.23
死后120 h	1.12±0.31	1.57±0.33