IL-10、TGF-β1在小鼠深静脉血栓中的时序性变化

doi:10.12116/j.issn.1004-5619.2023.430506

摘要/Abstract

摘要：

目的检测小鼠深静脉血栓发展过程中白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的表达变化，探讨其在血栓形成时间推断中的应用价值。方法对实验组小鼠建立下腔静脉结扎模型，分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d过量麻醉处死小鼠，在结扎点的下方提取形成血栓的下腔静脉段。对照组小鼠不进行结扎，提取与实验组相同部位的正常下腔静脉段作为对照样本。应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法和real-time qPCR检测IL-10和TGF-β1在血栓形成期间的表达变化。结果免疫组织化学染色结果显示，IL-10主要表达于血栓中的单核细胞，TGF-β1主要表达于血栓中的单核细胞和成纤维样细胞。蛋白质印迹法以及real-time qPCR检测结果显示，各实验组IL-10和TGF-β1的表达水平均高于对照组。IL-10的mRNA及蛋白水平分别于术后7 d和10 d达到峰值，术后7 d的mRNA表达量是对照组的（4.72±0.15）倍，术后10 d的蛋白表达量是对照组的（7.15±0.28）倍。TGF-β1的mRNA及蛋白水平分别于术后10 d和14 d达到峰值，术后10 d的mRNA表达量是对照组的（2.58±0.14）倍，术后14 d的蛋白表达量是对照组的（4.34±0.19）倍。结论深静脉血栓演变期间IL-10和TGF-β1呈现时序性表达变化，IL-10和TGF-β1的表达水平可以为血栓形成时间推断提供参考依据。

关键词: 法医病理学, 深静脉血栓形成, 白细胞介素-10, 转化生长因子-β1, 时序性表达, 小鼠

Abstract:

Objective To detect the expression changes of interleukin-10 （IL-10） and transforming growth factor-β1 （TGF-β1） during the development of deep vein thrombosis in mice, and to explore the application value of them in thrombus age estimation. Methods The mice in the experimental group were subjected to ligation of inferior vena cava. The mice were sacrificed by excessive anesthesia at 1 d, 3 d, 5 d, 7 d, 10 d, 14 d and 21 d after ligation, respectively. The inferior vena cava segment with thrombosis was extracted below the ligation point. The mice in the control group were not ligated, and the inferior vena cava segment at the same position as the experimental group was extracted. The expression changes of IL-10 and TGF-β1 were detected by immunohistochemistry （IHC）, Western blotting and real-time qPCR. Results IHC results revealed that IL-10 was mainly expressed in monocytes in thrombosis and TGF-β1 was mainly expressed in monocytes and fibroblast-like cells in thrombosis. Western blotting and real-time qPCR showed that the relative expression levels of IL-10 and TGF-β1 in each experimental group were higher than those in the control group. The mRNA and protein levels of IL-10 reached the peak at 7 d and 10 d after ligation, respectively. The mRNA expression level at 7 d after ligation was 4.72±0.15 times that of the control group, and the protein expression level at 10 d after ligation was 7.15±0.28 times that of the control group. The mRNA and protein levels of TGF-β1 reached the peak at 10 d and 14 d after ligation, respectively. The mRNA expression level at 10 d after ligation was 2.58±0.14 times that of the control group, and the protein expression level at 14 d after ligation was 4.34±0.19 times that of the control group. Conclusion The expressions of IL-10 and TGF-β1 during the evolution of deep vein thrombosis present time-dependent sequential changes, and the expression levels of IL-10 and TGF-β1 can provide a reference basis for thrombus age estimation.

Key words: forensic pathology, deep venous thrombosis, interleukin-10 （IL-10）, transforming growth factor-β1 （TGF-β1）, time-dependent sequential expression, mice

中图分类号:

吴娟娟, 黄俊杰, 张煜, 卓嘉英, 陈刚, 杨舒涵, 赵蕴琦, 范琰琰. IL-10、TGF-β1在小鼠深静脉血栓中的时序性变化[J]. 法医学杂志, 2024, 40(2): 179-185.

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图/表 6

表1 IL-10、TGF-β1和GAPDH基因的特异性引物序列

Tab. 1 Specific primer sequences of IL-10， TGF-β1 and GAPDH genes

基因	引物序列（5′→3′）
GAPDH	F：AGGTCGGTGTGAACGGATTTG
	R：GGGGTCGTTGATGGCAACA
IL-10	F：GCTGTCATCGATTTCTCCCCT
	R：GACACCTTGGTCTTGGAGCTTAT
TGF-β1	F：ACTGGAGTTGTACGGCAGTG
	R：GGGGCTGATCCCGTTGATT

图1 术后不同时间点血栓样本的IL-10免疫组织化学染色结果A：术后1 d；B：术后7 d；C：术后14 d。

Fig. 1 Immunohistochemical staining results of IL-10 in thrombus samples at different time points after ligation

图2 术后不同时间点血栓样本的TGF-β1免疫组织化学染色结果A：术后1 d；B：术后7 d；C：术后14 d。

Fig. 2 Immunohistochemical staining results of TGF-β1 in thrombus samples at different time points after ligation

表2 术后不同时间点血栓样本中IL-10和TGF-β1的阳性细胞率 (n=5，x¯±s，%)

Tab. 2 The positive cell rates of IL-10 and TGF-β1 inthrombus samples at different time points after ligation

时间点	IL-10	TGF-β1
术后1 d	16.4±2.7	2.2±1.3
术后3 d	23.3±1.8	17.3±5.0^1）
术后5 d	64.3±2.5^1）	54.0±1.6^1）
术后7 d	73.0±3.9^1）	74.9±1.9^1）
术后10 d	81.2±2.8^1）	79.1±2.1
术后14 d	81.8±2.9	85.8±1.7^1）
术后21 d	68.8±1.4^1）	69.8±0.4^1）

图3 对照组及各实验组血栓样本IL-10和TGF-β1的蛋白表达

Fig. 3 Expression of IL-10 and TGF-β1 protein in thrombussamples of control group and experimental group

表3 对照组及各实验组血栓样本IL-10和TGF-β1的蛋白和mRNA的相对表达量 (n=5，x¯±s)

Tab. 3 Relative expression of IL-10 and TGF-β1protein and mRNA in thrombus samples ofcontrol group and experimental group

组别	IL-10		TGF-β1
组别	蛋白	mRNA	蛋白	mRNA
对照	1.00±0.00	1.00±0.08	1.00±0.00	1.00±0.06
1 d	3.16±0.20^1）	2.17±0.16^1）	1.79±0.06^1）	1.17±0.10
3 d	4.48±0.15^1）2）	3.18±0.22^1）2）	2.47±0.16^1）2）	1.79±0.07^1）2）
5 d	5.19±0.13^1）2）	3.32±0.19^1）	3.06±0.10^1）2）	2.00±0.08^1）
7 d	5.63±0.15^1）	4.72±0.15^1）2）	3.28±0.13^1）	2.28±0.09^1）
10 d	7.15±0.28^1）2）	3.31±0.15^1）2）	3.77±0.24^1）2）	2.58±0.14^1）2）
14 d	6.62±0.18^1）2）	2.19±0.06^1）2）	4.34±0.19^1）2）	2.02±0.12^1）2）
21 d	4.48±0.24^1）2）	0.53±0.04^1）2）	1.67±0.17^1）2）	1.14±0.10^2）

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