Temporal Expression of NETosis Marker CitH3 in Deep Vein Thrombosis in Mice

doi:10.12116/j.issn.1004-5619.2024.441004

Abstract

Abstract:

Objective To detect the expression changes of citrullinated histone H3 （CitH3） during the development of deep vein thrombosis （DVT） in mice, and to explore its value in estimating the time to thrombosis. Methods The inferior vena cava （IVC） of mice was ligated to establish a thrombosis model induced by congestion. Mice were sacrificed under excessive anesthesia at 0 h, 1 d, 3 d, 5 d, 7 d, 10 d, 14 d and 21 d after the modeling, respectively. The congested IVC segments （0 h after modeling） and the thrombosed IVC segments （1-21 days after modeling） were extracted. Immunohistochemistry and double immunofluorescence staining were used to observe the number of neutrophils and the expression of CitH3 during thrombosis. Western blotting was used to detect the protein expression level of CitH3. Results During thrombosis, CitH3 was mainly expressed in neutrophils within the thrombus. A small number of neutrophils and a few CitH3-positive cells were observed at 0 h after modeling in the congested IVC. Between 1 d and 21 d after modeling, the number of neutrophils reached a peak at 1 d and gradually decreased. The number of CitH3-positive cells and their ratio to neutrophils began to increase at 1 d, reached a peak at 5 d after modeling, and then decreased. The expression level of CitH3 protein began to increase at 1 d and reached a peak at 5 d after modeling. Conclusion The expression of CitH3 during DVI shows temporal changes, and is expected to become a biological marker for estimating the formation time of thrombosis.

Key words: forensic pathology, deep vein thrombosis, citrullinated histone H3 （CitH3）, temporal expression, mice

CLC Number:

Qian WANG, Song-min YANG, Juan-juan WU, Yu ZHANG, Xiang-meng WANG, Gang CHEN, Peng-fei JIANG. Temporal Expression of NETosis Marker CitH3 in Deep Vein Thrombosis in Mice[J]. Journal of Forensic Medicine, 2025, 41(3): 201-207.

Figures/Tables 5

Tab. 1 The numbers of CitH3-positive cells andneutrophils， as well as their ratios in each group

组别	CitH3阳性细胞数量	中性粒细胞数量	C/N
建模后0 h	0.4 $±$ 0.5	8.6 $±$ 2.9	3.5 $±$ 4.8
建模后1 d	26.0 $±$ 5.0^1）2）	96.4 $±$ 10.8^1）2）	26.9 $±$ 3.0^1）2）
建模后3 d	40.4 $±$ 5.0^1）2）	77.8 $±$ 9.1^1）2）	52.0 $±$ 4.1^1）2）
建模后5 d	48.4 $±$ 5.9^1）2）	56.8 $±$ 6.9^1）2）	85.6 $±$ 8.5^1）2）
建模后7 d	25.2 $±$ 4.1^1）2）	47.8 $±$ 8.3^1）	53.1 $±$ 5.6^1）2）
建模后10 d	3.4 $±$ 1.5^2）	43.4 $±$ 6.1^1）	7.7 $±$ 2.7^2）
建模后14 d	1.2 $±$ 0.8	35.0 $±$ 6.2^1）	3.2 $±$ 2.1
建模后21 d	0.6 $±$ 0.5	20.2 $±$ 2.4^2）	2.8 $±$ 2.5

Tab. 1 The numbers of CitH3-positive cells andneutrophils， as well as their ratios in each group

组别	CitH3阳性细胞数量	中性粒细胞数量	C/N
建模后0 h	0.4 $±$ 0.5	8.6 $±$ 2.9	3.5 $±$ 4.8
建模后1 d	26.0 $±$ 5.0^1）2）	96.4 $±$ 10.8^1）2）	26.9 $±$ 3.0^1）2）
建模后3 d	40.4 $±$ 5.0^1）2）	77.8 $±$ 9.1^1）2）	52.0 $±$ 4.1^1）2）
建模后5 d	48.4 $±$ 5.9^1）2）	56.8 $±$ 6.9^1）2）	85.6 $±$ 8.5^1）2）
建模后7 d	25.2 $±$ 4.1^1）2）	47.8 $±$ 8.3^1）	53.1 $±$ 5.6^1）2）
建模后10 d	3.4 $±$ 1.5^2）	43.4 $±$ 6.1^1）	7.7 $±$ 2.7^2）
建模后14 d	1.2 $±$ 0.8	35.0 $±$ 6.2^1）	3.2 $±$ 2.1
建模后21 d	0.6 $±$ 0.5	20.2 $±$ 2.4^2）	2.8 $±$ 2.5

Fig. 1 Immunohistochemical staining results of CitH3 and MPO during the development of IVC thrombosis in mice

Fig. 2 Double immunofluorescence staining results of CitH3 and MPO in thrombus at 3 d after modeling

Fig. 3 Western blotting analysis of CitH3 protein expression at different time points after modeling

Tab. 2 Relative expression levels ofCitH3 protein in each group

组别	CitH3蛋白
建模后0 h	0.03 $±$ 0.01
建模后1 d	0.53 $±$ 0.05^1）2）
建模后3 d	0.74 $±$ 0.07^1）2）
建模后5 d	0.98 $±$ 0.12^1）2）
建模后7 d	0.47 $±$ 0.05^1）2）
建模后10 d	0.15 $±$ 0.03^1）2）
建模后14 d	0.09 $±$ 0.03
建模后21 d	0.04 $±$ 0.02

Tab. 2 Relative expression levels ofCitH3 protein in each group

组别	CitH3蛋白
建模后0 h	0.03 $±$ 0.01
建模后1 d	0.53 $±$ 0.05^1）2）
建模后3 d	0.74 $±$ 0.07^1）2）
建模后5 d	0.98 $±$ 0.12^1）2）
建模后7 d	0.47 $±$ 0.05^1）2）
建模后10 d	0.15 $±$ 0.03^1）2）
建模后14 d	0.09 $±$ 0.03
建模后21 d	0.04 $±$ 0.02

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