酶消解-LC-MS/MS检测毛发中依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因

doi:10.12116/j.issn.1004-5619.2025.350801

法医学杂志 ›› 2026, Vol. 42 ›› Issue (3): 261-268.DOI: 10.12116/j.issn.1004-5619.2025.350801

酶消解-LC-MS/MS检测毛发中依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因

杨明瑾¹(), 何美云², 杜蔚安³, 梅朋飞¹, 程雪莲², 刘昕¹, 施月森¹, 金昊¹, 胡伊玲¹, 何美欣¹, 陈玲², 刘超¹^,⁴()

^1.广东省精神活性物质监测与安全重点实验室广东省毒品实验技术中心国家毒品实验室广东分中心，广东广州 510230
^2.南方医科大学法医学院，广东广州 510515
^3.珠海市祥臻生物科技有限公司，广东珠海 519000
^4.暨南大学生物活性分子与成药性优化全国重点实验室广东省天然生物活性分子与新药发现基础研究卓越中心，广东广州 510632

收稿日期:2025-08-04 发布日期:2026-09-09 出版日期:2026-06-25
通讯作者: 刘超
作者简介:杨明瑾（1988—），女，博士，副研究员，主要从事理化检验鉴定和纳米传感器研究；E-mail：yangmingjin020@163.com
基金资助:
国家重点研发计划资助项目(2024YFC3306603);公安部科技计划资助项目(2023JSM07)

Enzyme Digestion LC-MS/MS Detection of Etomidate， Ketamine， Methamphe‑ tamine and Codeine in Hair

Mingjin YANG¹(), Meiyun HE², Weian DU³, Pengfei MEI¹, Xuelian CHENG², Xin LIU¹, Yuesen SHI¹, Hao JIN¹, Yiling HU¹, Meixin HE¹, Ling CHEN², Chao LIU¹^,⁴()

^1.Guangdong Provincial Key Laboratory of Psychoactive Substances Monitoring and Safety, Anti-Drug Technology Center of Guangdong Province, National Anti-Drug Laboratory Guangdong Regional Center, Guangzhou 510230, China
^2.School of Forensic Medicine, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China
^3.Zhuhai Xiangzhen Biotechnology Co. , Ltd. , Zhuhai 519000, Guangdong Province, China
^4.State Key Laboratory of Bioactive Molecules and Druggability Assessment, Guangdong Provincial Basic Research Center of Excellence for Natural Bioactive Molecules and Discovery of Innovative Drugs, Jinan University, Guangzhou 510632, China

Received:2025-08-04 Online:2026-09-09 Published:2026-06-25
Contact: Chao LIU

1. 作者贡献声明和利益冲突声明.pdf(133KB)

摘要/Abstract

摘要：

目的建立基于酶消解前处理的液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）方法，用于毛发中毒品的快速定性与定量检测。方法采用控制变量法优化依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因的酶消解条件，包括二硫苏糖醇和蛋白酶K的浓度、孵育温度和酶解时间。毛发样本经酶消解后，以0.22 μm滤膜过滤，采用C18色谱柱分离，以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱，采用电喷雾离子源和多重反应监测模式进行检测。经验证后，将该方法应用于155例涉毒毛发样本检测，并与冷冻湿研磨前处理方法进行提取效果对比分析。结果毛发中依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因在各自的线性范围内均呈现良好的线性关系（R²>0.998 0），检出限为0.005~0.010 ng/mg，定量限为0.02~0.04 ng/mg。基质效应（-12.09%~8.23%）、日内和日间精密度相对标准偏差分别为2.56%~10.37%和5.50%~15.11%，平均回收率（88.97%~104.05%）均满足检测要求。涉毒毛发样本检测结果表明，酶消解法与研磨法具有良好的一致性，且酶消解法对可待因的提取量高于研磨法。结论所建立方法操作简便、灵敏度高、重现性好，适用于毛发中毒品检测，为法医学鉴定提供了一种高效、可靠的检测手段。

关键词: 法医学, 毒物分析, 毛发分析, 酶消解法, 液相色谱-串联质谱, 毒品

Abstract:

Objective To establish a liquid chromatography-tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）method based on enzymatic digestion for the rapid qualitative and quantitative detection of drugs in hair. Methods The enzymatic digestion parameters for etomidate, ketamine, methamphetamine, and codeine, including dithiothreitol （DTT） concentration, proteinase K concentration, incubation temperature and digestion time were optimized using controlled-variable experiments. After digestion, hair samples were filtered through a 0.22 μm membrane and separated on a C18 column with a gradient elution using 0.1% formic acid in water and 0.1% formic acid in acetonitrile and analyzed using electrospray ionization （ESI） in multiple reaction monitoring （MRM） mode. After validation, the method was applied to 155 drug-related hair samples and compared with the cryogenic wet-grinding method. Results Etomidate, ketamine, methamphetamine, and codeine in hair samples all showed good linearity with their respective linear ranges （R²>0.998 0）, with limits of detection （LOD） of 0.005-0.010 ng/mg and limits of quantification （LOQ） of 0.02-0.04 ng/mg. Matrix effects ranged from -12.09% to 8.23%, while the relative standard deviations of intra-day precision and inter-day precision were 2.56%-10.37% and 5.50%-15.11%, respectively. Average recoveries （88.97%-104.05%） met analytical requirements. Results from drug-related hair samples suggested good consistency between enzymatic digestion and cryogenic grinding pretreatment method, while enzymatic digestion demonstrated higher extraction amounts for codeine than cryogenic grinding pretreatment method. Conclusion The established method is simple to operate, highly sensitive, and reproducible, making it suitable for high-throughput hair drug analysis, providing an efficient and reliable analytical method for forensic identification.

Key words: forensic medicine, toxicological analysis, hair analysis, enzymatic digestion method, LC-MS/MS, drugs

中图分类号:

杨明瑾, 何美云, 杜蔚安, 梅朋飞, 程雪莲, 刘昕, 施月森, 金昊, 胡伊玲, 何美欣, 陈玲, 刘超. 酶消解-LC-MS/MS检测毛发中依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因[J]. 法医学杂志, 2026, 42(3): 261-268.

Mingjin YANG, Meiyun HE, Weian DU, Pengfei MEI, Xuelian CHENG, Xin LIU, Yuesen SHI, Hao JIN, Yiling HU, Meixin HE, Ling CHEN, Chao LIU. Enzyme Digestion LC-MS/MS Detection of Etomidate， Ketamine， Methamphe‑ tamine and Codeine in Hair[J]. Journal of Forensic Medicine, 2026, 42(3): 261-268.

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图/表 8

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毒品	保留时间/min	定量离子对	定性离子对	锥孔电压/V	碰撞能量/eV
依托咪酯	5.34	245.1/141.1	245.1/141.1 245.1/95.1	22	8，22
氯胺酮	3.43	238.1/207.1	238.1/207.1 238.1/125.1	30	25，10
甲基苯丙胺	2.97	150.1/119.1	150.1/119.1 150.1/91.1	30	15，8
可待因	2.37	300.1/215.1	300.1/215.1 300.1/165.1	24	20，50

毒品	保留时间/min	定量离子对	定性离子对	锥孔电压/V	碰撞能量/eV
依托咪酯	5.34	245.1/141.1	245.1/141.1 245.1/95.1	22	8，22
氯胺酮	3.43	238.1/207.1	238.1/207.1 238.1/125.1	30	25，10
甲基苯丙胺	2.97	150.1/119.1	150.1/119.1 150.1/91.1	30	15，8
可待因	2.37	300.1/215.1	300.1/215.1 300.1/165.1	24	20，50

DTT/（mg∙mL^-1）	依托咪酯	氯胺酮	甲基苯丙胺	可待因
0	2.374±0.008	1.208±0.068	2.521±0.089	2.708±0.232
3	5.542±0.082^1）	3.648±0.460^1）	4.517±0.278^1）	8.601±0.471^1）
6	5.500±0.125^1）	4.011±0.435^1）	4.023±0.487^1）	8.321±0.166^1）
12	5.783±0.152^1）	3.589±0.950^1）	4.152±0.585^1）	7.865±0.689^1）

DTT/（mg∙mL^-1）	依托咪酯	氯胺酮	甲基苯丙胺	可待因
0	2.374±0.008	1.208±0.068	2.521±0.089	2.708±0.232
3	5.542±0.082^1）	3.648±0.460^1）	4.517±0.278^1）	8.601±0.471^1）
6	5.500±0.125^1）	4.011±0.435^1）	4.023±0.487^1）	8.321±0.166^1）
12	5.783±0.152^1）	3.589±0.950^1）	4.152±0.585^1）	7.865±0.689^1）

蛋白酶K/U∙mL^-1	依托咪酯	氯胺酮	甲基苯丙胺	可待因
0	2.439±0.157	2.381±0.110	0.400±0.002	0.584±0.027
2.5	2.705±0.124	2.701±0.030^1）	0.492±0.046^1）	0.719±0.070
5	3.139±0.265^1）	3.383±0.052^1）2）	0.600±0.035^1）2）	0.800±0.035^1）
10	3.025±0.232^1）	3.400±0.072^1）	0.581±0.026^1）	0.797±0.081^1）

酶消解-LC-MS/MS检测毛发中依托咪酯、氯胺酮、甲基苯丙胺和可待因

Enzyme Digestion LC-MS/MS Detection of Etomidate， Ketamine， Methamphe‑ tamine and Codeine in Hair

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温度/℃	依托咪酯	氯胺酮	甲基苯丙胺	可待因
室温	1.793±0.331	1.038±0.056	0.466±0.021	0.247±0.010
37	2.449±0.259^1）	1.328±0.038^1）	1.372±0.055^1）	0.673±0.179^1）
48	3.486±0.271^1）2）	1.334±0.040^1）	1.360±0.019^1）	0.975±0.137^1）2）
58	3.657±0.490^1）2）	1.465±0.016^1）	1.812±0.121^1）2）	0.975±0.073^1）2）
68	3.497±0.210^1）2）	1.345±0.128^1）	1.624±0.172^1）2）3）	0.758±0.022^1）

酶解时间/min	依托咪酯	氯胺酮	甲基苯丙胺	可待因
5	1.485±0.074	1.009±0.078	2.038±0.132	0.597±0.050
15	2.925±0.236^1）	2.395±0.348^1）	4.106±0.564^1）	1.216±0.279^1）
30	5.922±0.469^1）2）	3.208±0.154^1）2）	5.977±0.471^1）2）	2.124±0.230^1）2）
45	6.313±0.221^1）2）	3.555±0.183^1）2）	6.132±0.348^1）2）	2.555±0.099^1）2）
60	6.334±0.108^1）2）	3.593±0.286^1）2）	6.313±0.342^1）2）	2.843±0.212^1）2）3）
120	6.584±0.129^1）2）	3.610±0.257^1）2）	6.271±0.403^1）2）	2.915±0.214^1）2）3）

毒品	线性范围	线性方程	R²	LOD	LOQ
依托咪酯	0.02~4.00	y=324 691x-53 316.9	0.998 0	0.005	0.02
甲基苯丙胺	0.02~4.00	y=711 422x-21 020.8	0.999 5	0.005	0.02
氯胺酮	0.02~4.00	y=459 057x+85 405.8	0.998 0	0.005	0.02
可待因	0.04~4.00	y=32 690x-2 631.6	0.999 8	0.010	0.04

毒品	质量浓度/（ng∙mL^-1）	基质效应	RSD	平均回收率	日内RSD	日间RSD
依托咪酯	0.5	-12.09	5.76	92.26	3.66	6.13
	5	-9.09	9.57	99.59	10.37	10.95
	50	-1.03	5.33	91.38	6.77	7.90
甲基苯丙胺	0.5	-1.80	12.58	96.76	7.44	10.89
	5	-10.79	8.61	99.96	4.49	12.14
	50	2.69	9.30	100.32	3.55	9.53
氯胺酮	0.5	-2.88	9.15	100.40	9.05	11.29
	5	-7.44	8.07	95.20	5.32	5.50
	50	2.83	7.16	88.97	2.56	7.22
可待因	0.5	4.62	8.19	104.05	7.29	15.11
	5	5.36	11.28	100.24	8.44	10.36
	50	8.23	7.30	95.45	8.58	8.54

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