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常见嗜尸性昆虫mtDNA提取方法的比较
陈瑶清,郭亚东,李茂枝,等
2011, 27(4):
265-270.
DOI: 10.3969/j.issn.1004-5619.2011.04.007
摘要
(
1782 )
目的 比较十六烷基三甲基溴化铵(cetyl triethyl ammonium bromide,CTAB)法、十二烷基硫酸钠-醋酸钾(sodium dodecyl sulfate-potassium acetate,SDS-KAc)法和十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(sodium dodecyl sulfate-protein K,SDS-PK)法对法医学常见嗜尸性昆虫mtDNA的提取效果。 方法 随机采集放置在长沙地区室外草地家兔尸体上的大头金蝇、双色葬甲、金龟科、墨胸胡蜂4种72只常见嗜尸性昆虫,分别采用CTAB、SDS-KAc、SDS-PK 3种方法提取总DNA。核酸蛋白测定仪检测DNA纯度及浓度,用mtDNA特异性引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,对PCR产物进行序列测定,将测序结果上传到GenBank。 结果 3种方法均能成功提取4种嗜尸性昆虫的mtDNA,SDS-PK法提取效果最好,CTAB法对陈旧性样本提取效果优于另两种方法,SDS-KAc法对各类样本的提取效果相近。 结论 实验中应根据不同情况,选择最恰当的提取方法。制备高质量DNA推荐使用SDS-PK法,陈旧性样本推荐使用CTAB法,在各类预实验中可采取低成本的SDS-KAc法。
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